這種深紅色的熒光鬼筆環(huán)肽綴合物與F-肌動(dòng)蛋白選擇性結(jié)合，其光穩(wěn)定性比熒光素-鬼筆環(huán)肽綴合物要高得多。鬼筆環(huán)肽衍生物經(jīng)常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)或無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中用于標(biāo)記、鑒定和定量F-肌動(dòng)蛋白的便捷探針。鬼筆環(huán)肽與肌動(dòng)蛋白絲的結(jié)合比與肌動(dòng)蛋白單體的結(jié)合要緊密得多，從而導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白亞基從絲端解離的速率常數(shù)降低，從而通過(guò)防止絲解聚而基本穩(wěn)定了肌動(dòng)蛋白絲。而且，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動(dòng)蛋白的ATP水解活性。鬼筆環(huán)肽在細(xì)胞中不同濃度下的功能不同。當(dāng)以低濃度引入細(xì)胞質(zhì)時(shí)，鬼筆環(huán)肽將聚合度較低的胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白和纖維蛋白吸收到聚集的肌動(dòng)蛋白聚合物的穩(wěn)定“島"中，但它不會(huì)干擾應(yīng)力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是研究F-肌動(dòng)蛋白在細(xì)胞中分布的有效工具，方法是用熒光類似物標(biāo)記鬼筆環(huán)肽并將其用于染色肌動(dòng)蛋白絲以進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白絲以及體外觀察單個(gè)肌動(dòng)蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)的重要工具。

常在甲醛固定和透化的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)或無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中用于標(biāo)記、鑒定和定量F-肌動(dòng)蛋白的便捷探針。

1.將30μLDMSO加入粉末小瓶中。

2.將 1 μL 的鬼筆環(huán)肽SF 647綴合溶液添加到 1 mL含1% BSA 的 PBS 中。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)等分并儲(chǔ)存在-20℃，避光。

注意2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度的制備需要根據(jù)實(shí)際而定。

3.染色細(xì)胞：

3.1執(zhí)行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細(xì)胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因?yàn)榧状紩?huì)在固定過(guò)程中破壞肌動(dòng)蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定細(xì)胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細(xì)胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細(xì)胞中，并在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以除去過(guò)量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。

在微孔板孔中制備樣品

從樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽SF 647標(biāo)記溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘

清洗細(xì)胞在顯微鏡下觀察樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開(kāi)前短暫離心。

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標(biāo)題:Glycated ECM Derived Carbon Dots Inhibit Tumor Vasculogenic Mimicry by Disrupting RAGE Nuclear Translocation and Its Interaction With HMGB1

成員:Shaoting Zheng, Xiaoyan Zhang, Fan Yang, Zhi Chang, Jingxia Han, Heng Zhang, Huijuan Liu, Tao Sun

論文因子:27.4 發(fā)表期刊:ADVANCED MATERIALS pmid:40159891

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標(biāo)題:Microbial Tryptophan Metabolites Ameliorate Ovariectomy-Induced Bone Loss by Repairing Intestinal AhR-Mediated Gut-Bone Signaling Pathway

成員:Chuan Chen, Zheng Cao, Hehua Lei, Cui Zhang, Mengjing Wu, Shaohua Huang, Xinzhi Li, Denghui Xie, Maili Liu, Limin Zhang, Gang Chen

論文因子:14.3 發(fā)表期刊:Advanced Science pmid:39041942

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標(biāo)題:Long-Term Triclocarban Exposure Induced Enterotoxicity by Triggering Intestinal AhR-Mediated Inflammation and Disrupting Microbial Community in Mice

成員:Yuchen Song, Hehua Lei, Zheng Cao, Cui Zhang, Chuan Chen, Mengjing Wu, Huabao Zhang, Ruichen Du, Liu Lijun, Xiaoyu Chen, Limin Zhang

論文因子:4.1 發(fā)表期刊:CHEMICAL RESEARCH IN TOXICOLOGY pmid:38525689

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

SF647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

SF647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽