維生素E檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格：50管/24樣

維生素E檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品組成： 提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。 試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。 試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。 試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明： 維生素E（VitaminE）是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中主要的抗氧 化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過(guò)氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常 功能，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應(yīng)用 價(jià)值。 VE還原Fe3+為Fe2+，F(xiàn)e2+與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在530nm有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、漩渦震蕩儀。

操作步驟：

一、樣本處理 1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g，加入1mL提取液） 加入提取液，充分勻漿后用提取液定2mL，在漩渦混勻儀上震蕩5min，于25℃， 5000g離心10min， 取上層測(cè)定。 2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬(wàn)細(xì)胞加 入2mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；在漩 渦混勻儀上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層測(cè)定。 3. 血清：取0.2mL，加1.9mL提取液，漩渦儀混勻上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層 測(cè)定。

二、測(cè)定操作 對(duì)照管 測(cè)定管 樣品（μL） 500 500 試劑一（μL） 100 100 試劑二（μL） 100 試劑三（μL） 100 充分混勻，25℃反應(yīng) 5min 試劑四（μL） 300 300 充分混勻，于 1mL 玻璃比色皿，無(wú)水乙醇調(diào)零，測(cè)定 530nm 處吸光值，記 為 A 對(duì)照管和 A 測(cè)定管，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。

三、計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.022x+0.0065， R2=0.9978 1. 按照蛋白含量計(jì)算 VE含量（μg/mgprot）=（△A-0.0065）÷0.022×V反總÷（V樣×Cpr） =181.8×（△A-0.0065）÷Cpr 2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算 VE含量（μg/g）=（△A-0.0065）÷0.022×V反總÷（V樣×W÷V樣總） =181.8×（△A-0.0065）÷W 3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 VE含量（μg/104 cell）=（△A-0.0065）÷0.022×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總） =181.8×（△A-0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量 4. 按照液體體積計(jì)算 VE含量（μg/mL）=（△A-0.0065）÷0.022×V反總÷V樣×20 =1818×（△A-0.0065） V反總：反應(yīng)總體積，1mL；：V樣：加入樣本體積，0.5mL；V樣總：加入提取液體積，2mL； Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g 注意事項(xiàng)： 1. 若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，并在?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。 2. 低檢出限為 29.5μg/g。