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β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）檢測(cè)試劑盒

操作步驟：

一、粗酶液提取：稱取約 0.2g 組織，剪碎，放入預(yù)冷的研缽中，加入 1.0 mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿，12000g，4℃，離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定，（在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）：試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 標(biāo)準(zhǔn)管樣本或標(biāo)準(zhǔn)液 35 35 35 雙蒸水 35 35 試劑一 35 充分混勻，放入 37℃水浴 60 min 試劑二 230 230 230取 200μL 微量石英比色皿或 96 孔板中， 540nm 處記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測(cè)定，ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。

β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）檢測(cè)試劑盒

β-1,3-GA 活性計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管吸光度（x）和濃度（y，mg/ml）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA 帶入公式中計(jì)算出樣品中產(chǎn)生的還原糖的含量 y 值（mg/ml）（1） 按蛋白濃度計(jì)算單位的定義：每 mg 組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr （2） 按樣本鮮重計(jì)算單位的定義：每 g 組織每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U /g 鮮重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W (3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U /g 鮮重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.035mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度， mg/mL；W：樣本鮮重，g。

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入 3.5mL 雙蒸水，充分溶解待用；試劑二：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，4℃保存，含 10mg 無水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入 1ml 蒸餾水溶解，配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液備用，4℃可保存 1 周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長(zhǎng)時(shí)間。標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《The antifungal activity of a thaumatin-like protein from oyster Crassostrea gigas》 作者:X Niu,Q Xu,W Wang,Z Yu,Z Liu,C Qu,Y Liu,C Gong,L Wang,L Song 期刊:Invertebrate Survival Journal 影響因子:0.967 PMID: