產(chǎn)品名稱:谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: Glutamic-oxalacetic Transaminase（GOT）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC1560               產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣            產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：130
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
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簡要介紹：
GOT（ 2.6.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化可逆轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，是氨基酸代謝的重要酶。此外，GOT 在心肌細(xì)胞中含量高，臨床上一般常作為心肌梗塞和心肌炎的輔助檢查。肝臟損害時其血清濃度也可升高。
    GOT 催化 α-同戊二酸和天門冬氨酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸進(jìn)一步自行脫羧生成丙tong酸；丙tong酸可與2,4-二硝基ben肼反應(yīng)生成2,4-二硝基ben腙，在堿性條件下顯棕紅色；測定505nm 吸光度的變化，即可計算GOT 酶活力。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體30mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體8 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：液體8mL×1瓶， 4℃保存；
試劑三：液體80 mL×1瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，20μmol/mL丙tong酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
GOT（ 2.6.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化可逆轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，是氨基酸代謝的重要酶。此外，GOT在心肌細(xì)胞中含量高，臨床上一般常作為心肌梗塞和心肌炎的輔助檢查。肝臟損害時其血清濃度也可升高。
GOT催化 α-酮戊二酸和天門冬氨酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸進(jìn)一步自行脫羧生成丙tong酸；丙tong酸可與2,4-二硝基ben肼反應(yīng)生成2,4-二硝基ben腙，在堿性條件下顯棕紅色；測定505nm吸光度的變化，即可計算GOT酶活力。
實驗需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品測定的準(zhǔn)備 
1、 細(xì)胞或微生物樣品的制備 ：
先收集細(xì)胞或微生物樣品到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細(xì)胞或微生物加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。3500g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)冰浴行勻漿。3500g  4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定操作表

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長505nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

先將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋20μmol/mL，按下表 混合標(biāo)準(zhǔn)品和試劑一得到相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)管：

3、在EP管中加入下列試劑

混勻后，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）預(yù)熱30min

混勻后，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準(zhǔn)確水浴20min

混勻，室溫放置10min，在505nm波長處，測各管吸光度。
注：0μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)管為空白管。
三、計算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，以?A（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）為y軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kχ+b。將（A測定管-A對照管）帶入方程求x值。

1. GOT活性計算：

（1）按樣本鮮重計算：
單位定義：每小時每g鮮重樣品催化產(chǎn)生1μmol丙tong酸的量為一個GOT活力單位。
GOT（U/g鮮重）=x×（V樣本+V試劑一）÷（W×V樣本÷V樣總）÷T=12x÷W。
（2）按樣本蛋白濃度計算：
單位定義：每小時每mg組織蛋白催化產(chǎn)生1μmol丙tong酸的量為一個GOT活力單位。
GOT（U/mg prot）=x×（V樣本+V試劑一）÷（Cpr×V樣本）÷T=12x÷Cpr。
（3）按血清體積計算：
單位定義：每小時每mL血清樣品催化產(chǎn)生1μmol丙tong酸的量為一個GOT活力單位。
GOT（U/mL）=x×（V樣本+V試劑一）÷V樣本÷T=12x。
（4）按細(xì)胞數(shù)量計算：
單位定義：每小時每10⁴個細(xì)胞樣品催化產(chǎn)生1μmol丙tong酸的量為一個GOT活力單位。
GOT（U/10⁴ cell）=x×（V樣本+V試劑一）÷（V樣本÷V樣總×500）÷T=0.024x。
V樣本：吸取樣本體積，0.02mL；V試劑一：吸取試劑一體積，0.1mL；V樣總：吸取提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時間，0.5h；500：細(xì)胞個數(shù)，以萬計。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Hydroxychloroquine induced lung cancer suppression by enhancing chemo-sensitization and promoting the transition of M2-TAMs to M1-like macrophages》 作者:Yong Li, Fengjun Cao, Mingxing Li, Pindong Li, Yuandong Yu, Longchao Xiang, Tao Xu, Jinhua Lei, Yun Yan Tai, Jianyong Zhu, Bingbing Yang, Yingpin Jiang, Xiufang Zhang, Long Duo, Ping Chen & Xiongjie Yu  期刊:Journal of Experimental & Clinical Cancer Research 影響因子:5.646 PMID:30373678

谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性檢測試劑盒