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【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：人外周血淋巴細胞分離液
產(chǎn)品名稱：人外周血淋巴細胞分離液
英文名稱：Human Lymphocyte Separation Medium

【檢測原理】
密度梯度沉降法是根據(jù)細胞密度差異，借助細胞分離液和離心，進行細胞分離純化的常用方法之一。細胞梯度密度分離液產(chǎn)生一定程度的密度梯度，將稀釋后的全血鋪層于分離液之上。離心后，紅細胞、粒細胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞，就可從外周血中分離到單個核細胞。
本產(chǎn)品將葡聚糖和泛影葡胺按照一定比例混合，調(diào)整密度、滲透壓、pH值，經(jīng)過除菌過濾后制成一種密度在1.077g/mL并且與外周全血等滲的溶液（分離液），經(jīng)過密度梯度離心，使一定密度的細胞按照相應密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。
【檢驗方法】
1. 取新鮮抗凝全血，EDTA（枸櫞酸鈉或肝素）抗凝劑均可。用等體積PBS或0.9% NaCl稀釋全血。
2. 在離心管中加入一定體積的分離液，將稀釋后的血樣平鋪到分離液液面上方，保持兩液面界面清晰。分離液、抗凝未經(jīng)稀釋全血、PBS（或生理鹽水）體積為1:1:1。
3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子700-800g（2000-2500rpm）離心20-30min。
4. 離心結(jié)束后，管底是紅細胞，中間層是分離液，上層是血漿/組織勻漿層，血漿層與分離液層之間是一層薄較致密的白膜，即：單個核細胞（包括淋巴細胞和單核細胞）層。小心吸取白膜層到另一離心管中。
5. 用PBS或RPMI 1640稀釋到一定體積，顛倒混勻。室溫，水平轉(zhuǎn)子250g（1000rpm），離心10min，棄上清。重復洗滌1-2次。
6. 用PBS或合適的培養(yǎng)基將淋巴細胞重懸備用。
【主要組成成分】
本品為略帶黃色透明液體，主要組成成分是葡聚糖與泛影葡胺。
【儲存條件及有效期】
未開封并且4-30℃避光保存，有效期為2年；開包裝后保質(zhì)2周。
【適用儀器】
半徑15cm水平轉(zhuǎn)子離心機。
【樣本要求】
本分離液要求樣本為新鮮的抗凝血，血液收集時應無菌操作且儲存、處理和運輸過程中避免冷凍和冷藏。
【檢驗結(jié)果的解釋】
由于各品牌離心機的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心的時間，摸索佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）
【檢驗方法的局限性】
本實驗要求，在正常大氣壓下，樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為(20±5)℃。
【注意事項】
1. 啟封后應置4℃保存，避免微生物的污染。
2. 細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液溫度升室溫時，搖勻后使用。
3. 整個分離過程中，溫度應控制在（20±5）℃且無菌環(huán)境下進行，避免微生物的污染，否則會影響分離質(zhì)量。
4. 為保持淋巴細胞的活性，應該采血后盡快進行分離。分離細胞層實際上是單個核細胞層，包括淋巴細胞和單核細胞。
5. 分離時請嚴格按照比例，每一份淋巴細胞分離液加兩份稀釋后的血液。