ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒

操作步驟：

1,分光光度計(jì)預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 340nm,蒸餾水調(diào)零。并將試劑一置 30℃保溫 10min 以上。

2，在離心管中按順序加入以下試劑：測(cè)定管試劑一（μL） 100 試劑二（μL） 10 試劑三（μL） 50 試劑四（μL） 100 樣本（μL） 20 混勻，30℃保溫 15 min，置沸水浴中 1 min，冰浴迅速冷卻試劑一（μL） 300 試劑五（μL） 100 試劑六（μL） 10 試劑七（μL） 10 混勻后立即在 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒

AGP 活性計(jì)算：

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活性單位。 AGP（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷（V 樣×Cpr）÷T=2813×ΔA÷Cpr。此法需要自行測(cè)定粗酶液蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本鮮重計(jì)算單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。 AGP 活性（U/g mass）=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T=2813×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，7×10 -4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3mol/L/cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；

V 樣總：加入提取液體積，1 mL；d:比色皿光徑 1cm。Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。W：樣品質(zhì)量，g。T:反應(yīng)時(shí)間 2min。

ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒

提取液：液體 30mL×1 瓶，4℃保存; 試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；試劑二：粉劑×1 支，4℃保存；臨用前每支加入 250μL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍 4℃保存；試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 2mL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍 4℃保存；試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用每瓶前加入 3mL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍 4℃保存；試劑五：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 3mL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；試劑六：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前每支加入 250μL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存；試劑七：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前每支加入 250μL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存；