干細胞是一種未充分分化，具有自我復制能力的多潛能細胞，在一定誘導條件下，可以分化為成骨細胞、成軟骨細胞和成肌細胞等，還可以分化為巨噬細胞、脂肪細胞、內(nèi)皮細胞和成纖維細胞等骨髓基質(zhì)細胞，具有發(fā)育為骨、軟骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基質(zhì)等中胚層組織的潛能。

Solarbio新增了成骨/成脂誘導迷你化合物Kit，每種Kit均由對應種類經(jīng)典的可用于誘導的基礎試劑、用于鑒定與分析的高品質(zhì)染料以及相關試劑組成，具有良好的生物活性?？蛻粢部梢愿鶕?jù)自己的實驗需求刪減或添加其他的化合物，也可靈活定制專屬Kit，所有組分均已經(jīng)過NMR、HPLC或MS檢測，以確保化合物純度和準確性。

1. 接種骨髓間充質(zhì)干細胞

取對數(shù)生長期的細胞，按照2×10⁴cells/cm²的細胞密度接種至包被后的培養(yǎng)器皿中，于37℃，5% CO₂培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至相應的融合度（成骨誘導：60~70%；成脂誘導：90~100%），棄掉上清，加入成骨誘導分化培養(yǎng)基（含有地塞米松、維生素C、茜素紅等）或成脂誘導分化培養(yǎng)基（含有地塞米松、胰島素、吲哚美辛和IBMX）。

2. 細胞分化誘導

成骨誘導：每2~3天更換誘導培養(yǎng)基，于37℃，5%CO₂培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)，并注意觀察細胞形態(tài)變化（一般約14~28天左右）。根據(jù)細胞鈣鹽結晶析出和鈣質(zhì)結節(jié)形成的情況，決定終止細胞誘導的時間，進行后續(xù)固定和染色鑒定（茜素紅染色）。

成脂誘導：于37℃，5%CO₂培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約2~3天，更換為成脂誘導分化培養(yǎng)基維持液（只含有胰島素）培養(yǎng)1天。按照以上換液頻率繼續(xù)誘導（一般是3個循環(huán)，約14天左右），并注意觀察細胞形態(tài)變化。根據(jù)細胞誘導形成的脂滴數(shù)量和大小，決定終止細胞誘導的時間，并進行后續(xù)固定和染色鑒定（油紅O染色）。

3. 細胞固定

吸去培養(yǎng)基，使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性甲醛溶液覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30~60 min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。

4. 染色鑒定

加入適量的染色工作液，染色合適的時間（茜素紅：3~5min；油紅O：靜置染色30min），吸去染液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細胞干燥。

5. 誘導評估與分析

顯微鏡下觀察染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，成骨誘導后的鈣質(zhì)結節(jié)會與茜素紅染料結合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。成脂誘導后的脂滴會與油紅O染料結合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。

對于成骨誘導還可以進行半定量分析，上述顯微觀察結束后，棄上清，加入氯化十六烷基吡啶溶液，室溫下孵育15~60min溶解礦化結節(jié)（茜素紅），然后在562 nm處檢測上清的OD值。