CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以。
CCK法的操作步驟：
實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測
1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）。
2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
5、若暫時(shí)不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測
1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5% CO2）。
2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。
4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
7、若暫時(shí)不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
更新時(shí)間：2020-02-19
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