CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進行細胞計數(shù)的一個盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和細胞增殖、細胞毒性相關的實驗都可以。
CCK法的操作步驟：
實驗一：細胞活性檢測
1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5% CO2）。
2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。
4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。
實驗二：細胞增殖-毒性檢測
1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時（37℃，5% CO2）。
2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。
4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。
6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。
注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
更新時間：2020-02-19
點擊次數(shù)：1745
標準品
當前位置：
