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五年western blot 實驗經(jīng)驗總結
2016-03-11 1.抗體的選擇對于國內(nèi)的大多數(shù)實驗室來講，做westernblot實驗選擇抗體是個頭疼的問題。原因很簡單，買進口抗體捉襟見肘，買國產(chǎn)抗體得需要大無畏的勇氣，對于我所在的蘭州地區(qū)的實驗者而言，感觸尤深。在這五年的westernblot實驗歷程里，我先后用過進口抗體，進口抗體國內(nèi)分裝包裝，國產(chǎn)抗體，質(zhì)量良莠不齊。進口抗體一般不會出現(xiàn)閃失：abcam品種全，質(zhì)量過硬，但價高（3400元/100微升），而且說是100微升，但多能吸出來90微升；的價貴；比較有性價比的是CST的抗體，現(xiàn)...
蛋白質(zhì)分析技術
2016-03-11 蛋白質(zhì)分析技術(WesternBlot、ELISA、免疫熒光與免疫組化技術)1原理：將通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)轉移到硝酸纖維素或PVDF膜上，然后與能特異性識別待檢蛋白的抗體進行反應，洗滌去除沒有結合的特異性抗體后，加入標記的、能識別特異性抗體的種屬特異性抗體，反應一段時間后再次洗滌去除非特異性結合的標記抗體，加入適合標記物的檢測試劑進行顯色或發(fā)光等，觀察有無特異性蛋白條帶的出現(xiàn)，也可通過條帶的密度大小來進行特異性蛋白的半定量。2操作過程SDS-PAGE電泳→轉膜（...
簡要介紹細胞凍存管的使用
2016-02-24 凍存管又名冷凍管，是常用的實驗耗材，多用于生物、醫(yī)藥、食品等行業(yè)。凍存管一般用作實驗室細胞的低溫保藏。凍存管介紹：凍存管一般按容量劃分為0.5ml，1.0ml，1.5ml，1.8ml，2.0ml，4ml，5ml，7ml，10ml等。一般的凍存管不能進入液氮里，只有特殊材料處理的才可以放入。同時凍存管還有雙層的和層的帶硅膠墊和沒有硅膠墊的等種種，還有無色和雜色及各種純色等不同。如果需要進入液氮保藏的就要選擇密封的耐低溫的凍存管，還要認清所購買的凍存管是否是無菌以及無DNA,RN...
標本處理的幾個常見問題
2016-02-19 組織標本處理的步驟：取材、固定、脫水、包埋、切片、染色-HE組織標本的處理是簡單基本的工作程序，看起來簡單，認真做起來會有很多問題；1、取材的問題：厚度：3mm，大?。?x1.5cm；過厚過大固定不透，脫水不透，影響切片染色。2、固定液：常用福爾馬林，如果標本做免疫組化等其他實驗，用中性福爾馬林固定更好；3、固定液體量：要與標本容積比：1:9；不可將同一動物的內(nèi)臟放置在一個容器（常用的是試管），固定不透，夏天會發(fā)生腐敗細胞壞死自溶，不能區(qū)分是毒性作用所致還是溫度高所致。4、固...
組織芯片的研究進展及應用
2016-02-19 現(xiàn)代科學的發(fā)展，有兩類產(chǎn)品的使用，或者叫發(fā)明應用，對現(xiàn)代人類有著劃時代的貢獻。其一是微處理器使我們的生活方式發(fā)生了根本變化，它是計算機和許多家電等相關產(chǎn)品的心臟，它改變了我們的整個經(jīng)濟、文化生活，影響了整個人類的社會發(fā)展，已經(jīng)進入每一個家庭，給人類帶來了巨大的財富；另外一類產(chǎn)品－生物芯片給人類帶來的影響可能更大。生物芯片是20世紀80年代末發(fā)展起來的一項生物醫(yī)藥等領域的高新技術，通過生物芯片上集成的成千上萬的密集排列的分子微陣可以實現(xiàn)對細胞、蛋白質(zhì)、DNA以及其他生物組份的準...
索萊寶hanks液的作用及配置方法簡介
2016-01-26 Hank's液是生物醫(yī)學試驗中常見的平衡鹽溶液（BSS）之一，簡稱HBSS。主要用于配制培養(yǎng)液，稀釋劑和細胞清洗液，而不能單獨作為細胞，組織培養(yǎng)液。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別在于前者不含有鈣和鎂離子，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。Hanks液的配制原液ANaCl160gMgSO4·7H2O2gKCl8gMgCl2·6H2O2gCaCl22.8g溶于1000ml雙蒸水原液B（1）Na2HPO4·12H2O3.04gKH2PO41.2g葡萄糖20.0g...
索萊寶臺盼藍染色法的原理及操作步驟
2016-01-05 臺盼藍染液是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的完整性。細胞損傷或死亡時，臺盼藍可穿透變性的細胞膜，與解體的DNA結合，使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內(nèi)。故可以檢測細胞是否存活。臺盼藍染色法的原理正常的活細胞，胞膜結構完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內(nèi)；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培...
糖原PAS染色液（過碘酸-雪夫染色液）染色原理
2016-01-05 糖原染色是病理學中常規(guī)的染色方法之一，不僅能夠顯示糖原，還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、真菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強氧化劑，它能氧化糖類及有關物質(zhì)中的1，2-乙二醇基，使之變?yōu)槎?，醛與Schiff試劑能結合成一種品紅化合物，產(chǎn)生紫紅色。索萊寶糖原PAS染色液特點是采用solarbio*配方技術，大大增強了染色效果；性能穩(wěn)定，特異性強；操作簡捷，僅需1h左右。操作步驟：1、染色步驟1)切片脫蠟水；2)高碘酸液處理5-...

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